การทดสอบการย่อยได้โดยวิธี in vitro digestibility

เครื่อง Daisy II Incubator (Ankom Technology Crop) ใช้ในการศึกษาการย่อยได้โดยวิธี in vitro digestion

DAISY II Incubator ได้รับความเชื่อถือสูง มีประวัติการทดสอบอย่างเข้มข้นกับตัวอย่างหลากหลายประเภท ห้องปฏิบัติการทั่วโลกได้ประสบความสำเร็จในด้านการย่อยจริงในหลอดทดลอง, การย่อยที่มองเห็นได้, การศึกษาอัตราการย่อยด้วยเอนไซม์เซลลูเลส และการศึกษาอื่นๆ ที่เกี่ยวข้องสำหรับอาหารสัตว์และอาหารสัตว์ทุกชนิดด้วย

หลักการทำงาน

การเตรียมถุงกรองและตัวอย่าง:

แช่ถุงกรอง F57 ในอะซิโตน 3-5 นาทีแล้วผึ่งให้แห้งสนิท ชั่งน้ำหนักถุงกรอง F57 แต่ละถุงแล้วบันทึกน้ำหนัก (W1) 
ชั่งตัวอย่าง 0.25 - 0.5 กรัม (W2) ลงในถุงกรองโดยตรง แล้วซีลปิดถุงและวางในโถย่อยของ DaisyII Incubator รวมถุงเปล่าที่ปิดสนิทหนึ่งถุง (สำหรับ correction factor (C1))
การเตรียมสารละลายบัฟเฟอร์ (รวม): (สำหรับโถย่อยแต่ละโถ)
การเตรียมสารละลายบัฟเฟอร์ :
อุ่นสารละลายบัฟเฟอร์ทั้งสองชนิด (A และ B) ที่อุณหภูมิ 39°C ในภาชนะแยกกัน เติมสารละลาย B ประมาณ 266 มล. ลงในสารละลาย A 1,330 มล. (อัตราส่วน 1:5) ควรปรับปริมาณที่แน่นอนของ A ถึง B เพื่อให้ได้ค่า pH สุดท้ายที่ 6.8 ที่อุณหภูมิ 39°C ไม่จำเป็นต้องปรับค่า pH เพิ่มเติม เติมส่วนผสม A/B รวมกัน 1,600 มล. ลงในโถย่อยแต่ละโถ
วางโถย่อยที่มีตัวอย่างและสารละลายบัฟเฟอร์ลงในเครื่อง DAISY II Incubator แล้วเปิดสวิตช์ความร้อนและการกวน ปล่อยให้อุณหภูมิของโถย่อยสมดุลเป็นเวลาอย่างน้อย 20 - 30 นาที

การเตรียม Inoculum และการบ่ม :

A. อุ่นกระติกน้ำร้อน ขนาด 2 ลิตรสองขวดโดยเติมน้ำที่อุณหภูมิ 39°C เทน้ำอุ่นออกก่อนเก็บเชื้อเพาะในกระเพาะ ใช้ขั้นตอนการเก็บเชื้อที่เหมาะสมเพื่อเอาเชื้อเพาะในกระเพาะออกอย่างน้อย 2,000 มล. แล้วใส่ในกระติกน้ำร้อน ใส่แผ่นใยจากกระเพาะลงในกระติกน้ำร้อนหนึ่งใบพร้อมกับชุดเก็บเชื้อของคุณประมาณสอง "กำมือ"
B. อุ่นเครื่องบดปั่น โดยเติมน้ำที่อุณหภูมิ 39°C เทน้ำอุ่นออกก่อนเทเชื้อเพาะในกระเพาะลงในเครื่องปั่น ล้างภาชนะเครื่องปั่นด้วยก๊าซ CO2 แล้วปั่นด้วยความเร็วสูงเป็นเวลา 30 วินาที กรองของเหลวที่ย่อยแล้วผ่านผ้าขาวบางสี่ชั้นลงในขวดขนาด 5 ลิตร (อุ่นไว้ที่อุณหภูมิ 39°C) กรองของเหลวในกระเพาะที่เหลือในกระติกน้ำร้อนอีกใบผ่านผ้าขาวบางสี่ชั้นใหม่ลงในขวดขนาด 5 ลิตรใบเดียวกัน หมายเหตุ: เว้นขอบผ้าขาวบางไว้เพื่อให้บีบเนื้อหาของแผ่นกรองได้ง่ายขึ้น ควรไล่อากาศออกจากขวดด้วย CO2 อย่างต่อเนื่อง และไล่อากาศออกต่อไประหว่างการถ่ายเทเชื้อก่อโรค
C. นำขวดย่อยหนึ่งขวดออกจากเครื่องฟัก DAISY II แล้วเติม inoculum 400 มล. ลงในสารละลายบัฟเฟอร์และตัวอย่าง ล้างขวดย่อยด้วยก๊าซ CO2 เป็นเวลาสามสิบวินาทีแล้วปิดฝาให้แน่น
D. ทำซ้ำขั้นตอนนี้กับขวดย่อยทั้งหมดที่จะใช้  หมายเหตุ: ห้ามให้ก๊าซ CO2 ทำให้เกิดฟองผ่านเชื้อเพาะบัฟเฟอร์ ให้ใช้ CO2 เพื่อสร้างชั้นก๊าซคลุมสิ่งที่บรรจุอยู่ในขวดแทน
E. บ่มเป็นเวลา 48 ชั่วโมง ตู้บ่ม DAISYII จะรักษาอุณหภูมิไว้ที่ 39.5°C +/- 0.5 หากอุณหภูมิของขวดเปลี่ยนแปลงมากกว่า 1 องศา ให้ย้ายตู้บ่มไปยังตำแหน่งที่อุ่นกว่า หรือวางผ้าห่มหรือฉนวนที่คล้ายกันไว้เหนือตู้ฟักไข่
F. เมื่อเสร็จสิ้น ให้ถอดขวดออกและระบายของเหลวออก ล้างถุงด้วยน้ำประปาเย็นประมาณสองครั้ง
G. เมื่อต้องการหาค่าความสามารถในการย่อยได้ จำเป็นต้องกำจัดเศษจุลินทรีย์และเศษส่วนที่ละลายน้ำได้ที่เหลือโดยใช้สารละลายผงซักฟอกที่เป็นกลาง (NDF) หลังจากล้างถุงในน้ำแล้ว ให้ใส่ถุงลงในเครื่องวิเคราะห์เส้นใย ANKOM Delta หรือ ANKOM 200 และทำตามขั้นตอนในการกำหนด NDF บันทึกน้ำหนัก NDF หลังการทดสอบในหลอดทดลองเป็น W3 หมายเหตุ: สามารถเก็บถุงในตู้เย็นหรือช่องแช่แข็งได้จนกว่าจะดำเนินการตรวจสอบ NDF ได้
คำนวนค่า % IVTD และ % IVTDBDM จากสมการ 

% IVTD (as received basis)  = 100 - ((W3- (W1 x C1)) x 100)/W2) และ  

% IVTDDM (DM basis) = 100 - ((W3- (W1 x C1)) x100)/W2xDM) 

โดย 

W1  = น้ำหนักถุงเปล่า
W2 = น้ำหนักตัวอย่าง
W3 = น้ำหนักถุงและตัวอย่างหลักการย่อย 
C1   = ค่าแก้น้ำหนักถุง (น้ำหนักถุงหลังอบ/น้ำหนักถุงเริ่มต้น) 

จุดเด่น

• ศึกษาการย่อยโดยวิธี in vitro digestion ได้อย่างถูกต้องและแม่นยำ
  
• สามารถทดสอบได้ 100 ตัวอย่างต่อรอบ
  
• ลดต้นทุนแรงงาน
  
• ใช้เทคโนโลยีถุงกรอง รองรับการทดสอบจำนวนมาก และมีความแม่นยำ
  
• ลดความแปรปรวนของผู้ทดสอบ
  
• ประหยัดพื้นที่ห้องปฏิบัติการ

ผู้เขียนบทความ : ปัญจรุจน์ ตันติธนัยพงษ์ (ผู้เชี่ยวชาญผลิตภัณฑ์)

บริษัท ไซเอนซ์ บียอนด์ จำกัด

ดูสินค้าที่เกี่ยวข้อง